九州网页版和数明小讲堂 | 新冠(guàn)核酸(suān)检测之PCR技术
疫情防控
科学防疫 九州网页版和数明(míng)有“芯(xīn)”
当前上(shàng)海正处于(yú)抗(kàng)新型冠状病毒(dú)肺炎疫情防控的(de)关键阶(jiē)段,在(zài)这个(gè)没有硝(xiāo)烟的战(zhàn)场上(shàng),及时快速地(dì)筛(shāi)查新(xīn)冠(guàn)感染者并及时进(jìn)行隔离是阻止新冠病毒肆(sì)意(yì)蔓延的最有效且唯一的手段。核酸检测是目前筛(shāi)查(chá)新冠感染者最(zuì)精准、有(yǒu)效、低成本的技术方(fāng)式。
什么是PCR?
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction), 简(jiǎn)称(chēng)PCR, 又称多聚(jù)酶链式反应,是一项利用(yòng)DNA双链(liàn)复(fù)制的原理,在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。透过这项(xiàng)技术,可在短(duǎn)时(shí)间(jiān)内大量扩(kuò)增目的基因(yīn),而不必依赖大肠杆菌(jun1)或酵母菌等生物体。
PCR扩增的三个基本步骤
(1)变性:模板DNA经加热(rè)至94℃左右并(bìng)保持一定(dìng)时间后,基于DNA半(bàn)保(bǎo)留复制原理,还(hái)有碱基互补配(pèi)对原则,即复制的过程中双链DNA会解链,由双链(liàn)变成单链(liàn),为下轮反应做准备;
(2)退火:模板DNA经加热变性成单链(liàn)后(hòu),温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
(3)延(yán)伸:温度再升(shēng)至(zhì)72℃左右,在DNA聚(jù)合(hé)酶的作用下,把游离的dNTP按照碱基(jī)互补配对原则结合到单链上,形成一条由旧(jiù)链(liàn)和新链杂(zá)合成的新(xīn)的双链DNA。
PCR扩增原理:变形-退火-延伸温度循环(huán)
理(lǐ)论上(shàng),经过上面步骤,目标DNA浓度可增加一倍(bèi)。重复循环(huán)上(shàng)述过程,可获(huò)得更多的“半保留(liú)复制链”,而形成的新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环(huán)需(xū)2~4分钟, 仅需2~3小时就能将目标DNA扩增放大几百万倍。
全自动核酸提纯(chún)及实时荧光PCR分析系(xì)统
经过以(yǐ)上分析,我们就可(kě)以理解为什么核酸检测结果最快能在(zài)几个小时内出结果(guǒ)。
实时荧光PCR定量分(fèn)析
PCR扩增仪温度控制指标主要有:温度的准确性、均(jun1)匀性、以(yǐ)及(jí)升降温速度(dù)。
1. 温(wēn)度的准确性(xìng):是指样品孔温度与(yǔ)设定温度的(de)一(yī)致(zhì)性,它(tā)直接关系到(dào)实(shí)验的成败。因而对PCR扩增仪而言温度控制就(jiù)意味(wèi)着产品质量。
2. 温度的均匀性:是指样(yàng)品孔间的(de)温(wēn)度差(chà)异,它关系到(dào)在不同样品孔(kǒng)进行反(fǎn)应结果的一致性。
3. 升降温速度:更(gèng)快的升降温速度,可以有效缩短(duǎn)反(fǎn)应时间和可(kě)能的非特(tè)异性结合、反应的(de)时间,从而(ér)提高PCR反应(yīng)特异性。
相较于(yú)传统的相对稳(wěn)定耐用的(de)机(jī)械式,新的半导(dǎo)体(tǐ)温(wēn)控技术——TEC温度控制技术具有(yǒu)升降温更快速的(de)优势,已经成为PCR扩增(zēng)仪的首选温度控制(zhì)技术。
半导体制冷(lěng)器 (Thermo Electric Cooler,简称 TEC) 是利用半导(dǎo)体材料的帕尔(ěr)贴效应制(zhì)成(chéng)的。如图(tú)下所(suǒ)示,帕(pà)尔帖效应是(shì)指当直流电流通过两种(zhǒng)半导体材料组成的电偶时,其一端吸热,一端放(fàng)热的(de)现象(xiàng)。TEC 包括一些 P 型和 N 型对(组),它们(men)通过电极连在(zài)一起(qǐ),并且夹在两个陶瓷(cí)电极之(zhī)间,当(dāng)有电(diàn)流(liú)从 TEC 流过时,电流产(chǎn)生的热(rè)量会(huì)从 TEC 的 一侧传到(dào)另一侧,在 TEC 上产生″热″侧和″冷″侧(cè),这就(jiù)是(shì) TEC 的加(jiā)热(rè)与致冷原理。
帕尔帖效应,PN 节以(yǐ)及热流动(dòng)示意(yì)图
PCR扩增(zēng)仪一(yī)般(bān)具有两种温控(kòng)模式,即模(mó)块(kuài)温控模式(Block-control)和反应管温控模(mó)式(shì)(tube-control)。管内(nèi)样品的温度无法与温控(kòng)模块同时达到预设(shè)温(wēn)度(dù),特别是PCR反应中的孵育过程一般为30秒或更短,如果采(cǎi)用只(zhī)有模(mó)块(kuài)温控模式的(de)话,反应混合物(wù)孵育(yù)的时(shí)间与程序(xù)设定的时间会有相当大的差距。为了达到反应(yīng)管内(nèi)部(bù)温度精确控制,需采(cǎi)用反应管控制模模(mó)式,通(tōng)过温度控制算法进行参数标定和补偿,确保反应混合(hé)物按照程序(xù)设定的(de)时间维持预设温度。
科技战“疫”,九州网页版和数明在行动
面对近期香港、深圳、上海等地奥密(mì)克戎(róng)的快速扩散,核酸检测能力在数量和(hé)速度方面都面临(lín)着(zhe)极大的(de)考验。数(shù)明半导(dǎo)体(tǐ)积极发挥了科技技术方面的优势(shì),组织技术专家研究PCR扩增(zēng)技术的(de)优(yōu)化(huà)解决(jué)方案,以功率器件门(mén)极(jí)驱动芯(xīn)片和TEC控制器为着力(lì)点,优先保障(zhàng)芯片供应和交付,与(yǔ)客户一起助力抗疫,共(gòng)克时艰。
数(shù)明半导体自研(yán)的20V-600V耐压全系列的低(dī)边、半桥、三相半桥(qiáo)等功率管门极驱动芯片(SLM2103S、SLM2136等)可用于驱动TEC,协助PCR扩(kuò)增仪器(qì)客户快(kuài)速、方便地(dì)完成(chéng)系统设计,在当前半导体供应短缺时期,可以满足客(kè)户(hù)设计(jì)方案的快速(sù)变更、验证(zhèng)与(yǔ)量产(chǎn)。
600V耐(nài)压半桥功率器件驱动芯片工作示意图
600V耐压三相半桥(qiáo)功率器件驱(qū)动芯片工作示意图
九州网页版和数明半导(dǎo)体的单芯片TEC控(kòng)制器产(chǎn)品——SLM8833/8834/8835 集成了(le)TEC驱动(dòng)电路、低温飘高(gāo)精度温度误(wù)差放大器及环路补(bǔ)偿电路、温(wēn)度设定与传感电路,采用高效的(de)单电感架构(gòu),实现更紧凑、更高的转换(huàn)效率及更低的噪(zào)声;其中(zhōng)功(gōng)率级集(jí)成了超低阻抗的MOSFET,损耗更低寿命更(gèng)久;同时匹(pǐ)配模拟PID与数字PID两种温(wēn)控模(mó)式,以满足客户PCR扩增(zēng)仪的小型(xíng)化创新设计(jì)需求。
由SLM8834 构(gòu)成的 TEC 系统框图
模(mó)拟PID温控器模式
数字PID温控模式